--- Echelle de fragilité des peptides ---

Raptor

---POULET AUX HORMONES---
Il est difficile de trouver des données fiables sur la stabilité et le temps de conservation des différents peptides suivant leur forme (lyophilisée / reconstituée).

Cet article se veut clair et concis. J'exposerai ici en premier lieu, de façon générale, la stabilité et les conditions de conservation des peptides. Puis dans un second temps, le degré de stabilité de chaque peptides face: aux variations de température, à la lumière, aux chocs.

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RECONSTITUTION ET CONSERVATION DES PEPTIDES :

Généralités:

L'agent de reconstitution (diluant) utilisé pour les analogues de la GHRH (CJC, GRF etc..) et analogues de la ghréline (GHRPs, Ipamoréline, Hexaréline..) est l'eau bactériostatique (BW).

Voici quelques extraits intéressants d'articles/ouvrages sur le stockage:

- Le paragraphe suivant est issu d'une étude qui envoie des peptides aux domiciles de participants à un essai clinique.

Les fioles ont été conservées congelées jusqu'à envoie aux sujets, puis conservées à 4°C pendant 10 jours au domicile des participants.
Une analyse chromatographique (HPLC) a montré que le peptide est stable à 4°C pendant au moins 2 semaines.


- Ce qui suit semble indiquer que le GHRP-6 (qui est une chaîne peptidique très simple et courte, contrairement à l'IGF-1, qui est bien plus complexe) est relativement résistant à la dégradation à température ambiante, et ce, pendant près de cinq ans !

L'influence des différentes espèces de "tampons", (ici comprendre l'esterification) donc à savoir, acétate, citrate, phosphate et borate, jouent énormément sur la stabilité peptidique. Dans le cas du GHRP-6, il a été révélé que sa stabilité optimale est obtenue via un "tampon" (ester) acétate, avec un pH compris entre 5,5 et 6,0. La dégradation du GHRP-6 est plus importante lorsque conditionné via des "tampons" contenant du citrate que dans ceux contenant de l'acétate.
La solution aqueuse de GHRP-6 conditionnée avec de l'acétate (0,01 M, pH 5,5) a montré une prévision à hauteur de t90% (quasiment aucune dégradation), pendant 4,73ans (hé oui, c'est précis !) à 20 ° C (donc température ambiante).

Source: - Degradation kinetics of growth hormone-releasing hexapeptide (GHRP-6) in aqueous solution, In Sik Ha… International Journal of Pharmaceutics Volume 144, Issue 1, 22 November 1996, Pages 91-97

[NOTE: Gardez bien à l'esprit qu'on parle ici de conservation sous forme lyoplilisée, donc de poudre non reconstituée !
Lors de l'achat de GHRP-6, vous pourrez remarquer, si le site le précise, que c'est bel et bien de l'acétate de GHRP-6 ; )



- Il est également intéressant de noter les caractéristiques primaires de la solution aqueuse que nous utilisons pour reconstituer ces peptides, à savoir l'eau bactériostatique (BW):

L'eau bactériostatique pour injection (USP) est une solution stérile pour injection, apyrogène (non-pyrogénique), contenant 0,9% (9 mg/ml) d'alcool benzylique comme agent de conservation bactériostatique. Il est fourni dans un récipient à doses multiples sur lesquels les prélèvements répétés peut être faits pour diluer ou dissoudre le composé pour l'injection. Le pH est de 5,7 (4,5 à 7,0).

bacteriostatic-water.jpg

Autre source mettant en évidence la stabilité des peptides:

5.4 Stockage à l'état solide (sous forme de poudre lyoplilisée)

Les poudres lyophilisées peuvent être très stables aussi longtemps qu'elles ne sont pas reconstituées. Par exemple, Activase®, poudre lyophilisée, ne montre aucune perte significative de bioactivité après un stockage de plus de 4ans à température ambiante contrôlée.

La dégradation à l'état solide s'effectue souvent par agrégation. La stabilité d'une protéine à l'état solide dépend de la teneur en humidité du solide, de la température et de la composition de la formulation (en gros, la structure aminée en elle même, plus ou moins fragile suivant les liaisons utiliées).


Ces facteurs de dégradation deviennent de plus en plus important lorsque la longueur de la chaîne d'acides aminés devient importante et complexe. D'autant plus avec l'inclusion d'acides aminés sensibles à la dégradation.

Le stockage des peptides non-reconstitués, sous forme congelée (dépourvu d'humidité), est toujours de loin préférable pour un stockage à (très) long terme.
[NOTE: Attention à ne pas répéter des cycles de congélation/décongélation qui peuvent abimer le peptide.



La stabilité du GHRP-6 est excellente, qu'en est-il pour le MOD GRF[1-29] ?

Le GHRP-6 est une chaîne simple, sans acides aminés supplémentaires sensibles. Mais la GHRH, elle, est plus sensible car il s'agit d'une chaîne peptidique plus longue composée de certains acides aminés sensibles. Le Mod GRF(1-29), quant à lui, semble être stable.

Pour répondre aux questions de stabilité de la meilleure façon qui soit, il faut trouver des études qui examinent spécifiquement la stabilité du peptide qui nous intéresse. (Car chaque peptide possède ses propres données de conservation, stockage et degré de stabilité).


Nous avons déjà vu que le GHRP-6 est un peptide, simple et robuste. Désormais intéressons nous à une étude de stabilité pour un analogue de la GHRH: Le mod GRF[1-29] (parfois appelé à tort, CJC-1295 sans DAC).


Source: Investigation of the chemical stability of a new growth hormone-releasing hormone (GHRH) analogue by HPLC, M Idei, I Mezo, EZ Szabo, and G Keri, Biomed Chromatogr, March 1, 1996; 10(2): 89-91

La stabilité d'un nouvel analogue de la GHRH (D-Ala2,Nle27,(gamma-amino-butyric acid)30-GHRH(1-30)-NH2) a été étudiée au cours du stockage à différentes températures dans une solution aqueuse. Les échantillons stockés pendant différentes périodes de temps ont ensuite été analysés par HPLC.

Conclusions:

Il a été admis que, dans une solution aqueuse (donc sous forme reconstituée !), le D-Ala2, Nle27, (gamma-amino-butyrique) 30-GHRH(1-30)-NH2 (sacré nom, mais il faut ici comprendre en réalité le MOD GRF[1-29]) est stable:
-> au moins pendant 36 jours à 4°C
-> pour 28 jours à 25 ° C
-> et pendant 10 jours à 37°C !


[NOTE: ATTENTION, le MOD GRF[1-29] est considéré comme un peptide relativement stable ! Ce n'est par exemple pas le cas du hGH FRAGMENT[176-191], qui lui, est considéré comme un peptide extrêmement fragile et instable ! (Cf: voir plus bas).
Il ne faut donc pas prendre les données ci-dessus et les appliquer de façon généralisée à tous les peptides !]


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ECHELLE DE FRAGILITE DES PEPTIDES:

Voici une échelle de fragilité des différents peptides, classés dans l'ordre de leur degré de stabilité VS différend facteurs:


* Sensibles aux problèmes de température, sous forme lyophilisée: *

- hGH Frag[176-191]
- hGH synthétique (recombinante)
- IGF-1 (ici, comprendre l'IGF-1 de base (rhIGF-1[1-70], l'IGF-1 LR3 et l'IGF-1 DES[1-3])
- CJC-1295 avec DAC (en raison de sa liaison peptidique entre la lysine et le DAC, Drug Affinity Complex)



* Non sensibles aux problèmes de température, sous forme lyophilisée: *

- Mod GRF[1-29]
- Sermorelin (GHRH raccourcie à 29 acides aminés, parfois seulement appelé GRF[1-29])
- GHRP-6
- GHRP-2
- Ipamorelin
- Hexarelin
- MGF (que ce soit avec ou sans PEG)
- MT-1
- MT-2
- PT-141



* Sensibles au contact de l'oxygène (oxydation), sous forme lyophilisée (après reconstitution): *

- hGH Frag[176-191]
- hGH synthétique (recombinante)
- IGF-1 (ici, comprendre toutes les versions de l'IGF-1Ea, donc l'IGF-1 de base rhIGF-1[1-70], l'IGF-1 LR3 et l'IGF-1 DES[1-3])
- CJC-1295 avec DAC (en raison de sa liaison peptidique entre la lysine et le DAC, Drug Affinity Complex)
- Mod GRF[1-29]
- Sermorelin
- MGF (avec ou sans PEG)
- MT-1
- MT-2
- PT-141



* Non sensibles au contact de l'oxygène (oxydation), sous forme lyophilisée (après reconstitution): *

- GHRP-6
- GHRP-2
- Ipamorelin
- Hexarelin



* Sensibles aux chocs et contact lors de la reconstitution: *

- IGF-1 (ici, comprendre toutes les versions de l'IGF-1Ea, donc l'IGF-1 de base rhIGF-1[1-70], l'IGF-1 LR3 et l'IGF-1 DES[1-3])
- hGH Frag[176-191]
- hGH synthétique (recombinante)



* Sensibles à dégradation, après reconstitution, à cause du temps ou de traumatismes (fiole secouée, transportée, agitée etc): *

- MT-1
- MT-2
- PT-141
- hGH Frag[176-191]
- hGH synthétique (recombinante)
- IGF-1 (ici, comprendre toutes les versions de l'IGF-1Ea, donc l'IGF-1 de base rhIGF-1[1-70], l'IGF-1 LR3 et l'IGF-1 DES[1-3])
- CJC-1295 avec DAC (en raison de sa liaison peptidique entre la lysine et le DAC, Drug Affinity Complex)



* Dégradation la plus rapide dans le temps post-reconstitution: *

FORTE
- hGH Frag[176-191]
- IGF-1 (ici, comprendre toutes les versions de l'IGF-1Ea, donc l'IGF-1 de base rhIGF-1[1-70], l'IGF-1 LR3 et l'IGF-1 DES[1-3])

MODEREE
- hGH synthétique (recombinante)
- MT-2
- MT-1
- PT-141
- Sermorelin
- MGF (avec ou sans PEG)
- CJC-1295 avec DAC
- Mod GRF[1-29]

FAIBLE
- Ipamoréline

TRES FAIBLE VOIR NULLE
- GHRP-6
- GHRP-2
- Hexarelin


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En conclusion, on peut voir que les petits peptides comme le GHRP-6 et le GHRP-2 sont extremement robustes, que ce soit aux variations de températures, comme au temps ou aux chocs. L'ipamoréline, bien que plus complexe et légèrement plus fragiles, obtient également de très bonnes notes vis à vis de sa stabilité.

Pas d'étonnement pour l'IGF-1, et encore plus la GH recombinante qui, de par leur extrême complexité (191aa pour la GH humaine !) sont fragiles et à manier avec délicatesse.

Enfin, il est à noter la fragilité importante du hGH Fragment[176-191]. Cette version est plus puissante que sa proche cousine hGH FRAG[177-191], mais aussi bien plus fragile ! Il faut donc veiller à obtenir ce peptide sous cold-pack, à faire glisser l'eau bactério sur la paroie de la fiole et à ne pas l'agiter et l'utiliser dans des délais assez courts.


Bonne lecture.



--- Raptor ---


SOURCES:
Peptide fragility scale, http://www.datbtrue.co.uk/forums/showthread.php?7992-Peptide-Fragility-Scale
Storage and shelf-life of GHRH & GHRP-6, http://www.datbtrue.co.uk/forums/sh...***-Storage-and-shelf-life-of-GHRH-amp-GHRP-6
 
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GEAR

Sage parmi les Sages !
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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Merci raptor, au top!!

Ps: peut pas te mettre de réput...


Édit : l'igf1 est dans toutes les mauvaises catégories, aie... Même l'oxydation, c'est à dire ? Si on j'injecte de l'air dans la fiole pour mieux aspirer je risque de chaque fois énormément l'oxyder ?!
 
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Raptor

---POULET AUX HORMONES---
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Merci raptor, au top!!

Ps: peut pas te mettre de réput...


Édit : l'igf1 est dans toutes les mauvaises catégories, aie... Même l'oxydation, c'est à dire ? Si on j'injecte de l'air dans la fiole pour mieux aspirer je risque de chaque fois énormément l'oxyder ?!

Le fait que l'IGF-1 soit dans les catégories "à risque" n'est pas un problème en soit, si tu prends soin des fioles dès réception, que le peptide a voyagé sous cold-pack et pochette à bulles, et que tu reconstitue et utilise le produit doucement.

Pour l'oxydation, dans l'absolu, oui ta fiole, à la base stérile, est sous vide. Lorsque tu vas l'utiliser, tu vas injecter de l'air pour égaliser la pression. Et de ce fait, mettre la solution reconstituée au contact de l'air.
Après, je ne pense pas que ce soit ça qui abime le plus le peptide. C'est surtout la lumière et les (fortes) variations de température dont il faut se soucier.
Et pour certains peptides plus complexes et fragiles (IGF, hGH recombinante et hGH Fragment[176, 191]), les chocs et secousses.
 

fransou

le vieu de la vieille
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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

énorme comme a ton habitude raptor merci pour tout ç;

ça va servir pour beaucoup de monde s'est sur et aussi arrêter de voir toujours les même questions revenir ;-)
 

Befa

POUTRE APPARENTE
VIP
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Au top mon pote..... Merci :nice:
 

nikouly

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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Comme d'habitude, c'est clair et précis!
Merci!!
 

stade

En construction
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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Super article:nice:, merci.
Quand on voit les modes de livraisons des fournisseurs (aucun respect de la chaîne du froid, emballage parfois moyen) ne doit on pas éviter de commander ces produits en été ou période de canicule?
 

PIOU

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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Merci pour le post, peut plus te mettre de réput mais le coeur y est :danse-macarena-9541
 

cool.32

NEUROTYPE 1B
VIP
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vétéran
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

merci pour toutes ces infos RAPTOR .
Réput.
 

Bodyamateur

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Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Donc si je suis l’article, la température idéal pour la conservation du MOD GRF[1-29] est pas de 6°C n’y 5 mais 4°C.
Cet température est l’idéal ou simplement une température prise par hasard dans une « tranche » pour la réalisation de cet essai ?

« Le stockage des peptides non-reconstitués, sous forme congelée (dépourvu d'humidité), est toujours de loin préférable pour un stockage à (très) long terme. »
« Dépourvu d’humidité » : tous les congélateurs pour une utilisation alimentaire créer de l’humidité donc finalement c’est peu le réfrigérateur le meilleur compromis ^^
Donc mieux vaut une conservation au congélateur ou même freezer (?) que le réfrigérateur même pour une durée utilisation de quelque mois ?

Mais pourquoi parler d’humidité lorsque la fiole est sous vide ?

Pour l'eau bactériostatique (BW) une fois ouvert ou pas peut-on la congelé dans le but de limité la prolifération de bactéries ?
Raport est habitué a mon sens du détail ^^
 

Raptor

---POULET AUX HORMONES---
Re : --- Echelle de fragilité des peptides ---

Donc si je suis l’article, la température idéal pour la conservation du MOD GRF[1-29] est pas de 6°C n’y 5 mais 4°C.
Cet température est l’idéal ou simplement une température prise par hasard dans une « tranche » pour la réalisation de cet essai ?

« Le stockage des peptides non-reconstitués, sous forme congelée (dépourvu d'humidité), est toujours de loin préférable pour un stockage à (très) long terme. »
« Dépourvu d’humidité » : tous les congélateurs pour une utilisation alimentaire créer de l’humidité donc finalement c’est peu le réfrigérateur le meilleur compromis ^^
Donc mieux vaut une conservation au congélateur ou même freezer (?) que le réfrigérateur même pour une durée utilisation de quelque mois ?

Mais pourquoi parler d’humidité lorsque la fiole est sous vide ?

Pour l'eau bactériostatique (BW) une fois ouvert ou pas peut-on la congelé dans le but de limité la prolifération de bactéries ?
Raport est habitué a mon sens du détail ^^

La température de conservation en réfrigérateur est une tranche permettant une bonne conservation. Je ne pense pas qu'il y ai UNE température optimale au réfrigérateur ou que 4°C soit mieux que 5°C. C'est ce qu'on appel du "négligeable".

Concernant l'humidité, personnellement, je n'ai jamais eu de soucis avec, par exemple, de la poudre à moitié reconstituée à cause d'une humidité dans le réfrigérateur.
Peut être que des variations de température brutales entrainent la formation de condensation sur la paroi de la fiole ? A voir donc aussi si la fiole a été parfaitement scellée et est hermétique.

Pour l'eau bactériostatique, une fois ouverte et entamée, une conservation au réfrigérateur (2-8°C) me semble approprié. Pas de congélation, non, sinon tu vas reconstituer tes peptides avec un Mister Freeze : ]
 
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